İletişim
Menü
Kurumsal
Ürünler 
Uygulama Alanları 
Sektörler
Temsilcilikler
Medya & Basın
İletişim
İletişim Bilgileri
Sıkça Sorulan Sorular
Ark yapma, elektroporasyon kuvetinin içinde elektrik akımının kontrolsüz bir şimşek/kıvılcım şeklinde deşarj olmasıdır. Bu durum hücrelerin neredeyse tamamının ölümüne yol açar. Ark yapmasının temel nedeni numunenin içindeki yüksek tuz (iyon) konsantrasyonudur. İyon miktarı fazla olduğunda çözeltinin direnci düşer ve akım aşırı yükselir. Bunu önlemek için; transfeksiyon öncesinde DNA/RNA numuneleri tuzdan tamamen arındırılmalı (desalting), hücreler ultra saf su veya düşük iletkenlikli elektroporasyon tampon çözeltileri (buffer) ile yıkanmalı ve kuvet içinde hava kabarcığı kalmamasına dikkat edilmelidir.
CRISPR/Cas9 sisteminde rehber RNA (gRNA) ve Cas9 enzimi laboratuvarda birleştirilerek bir Ribonükleoprotein (RNP) kompleksi oluşturulur. Bu kompleks, kimyasal lipitlerin içine sığmayacak kadar büyük ve ağır bir protein yapısıdır. Elektroporasyon cihazlarının uyguladığı kare dalga elektriksel pulslar, hücre zarında bu dev protein kompleksinin geçebileceği genişlikte geçici nano-gözenekler açar. RNP doğrudan sitoplazmaya ve oradan çekirdeğe geçerek hedef geni en yüksek nakavt (knock-out) verimliliğiyle keser.
Açıklama
Elektroporasyon Sistemleri: Gen Transferi ve Transfeksiyon Teknolojileri
Elektroporasyon Teknolojisinde Dalga Biçimleri ve Mühendislik Parametreleri
- Üstel Azalma Dalgası (Exponential Decay Wave): Elektrik akımı belirlenen tepe voltajına (peak voltage) anında ulaşır ve ardından zamana bağlı olarak üstel bir eğriyle azalarak sıfıra iner. Özellikle bakteri (E. coli) ve maya (S. cerevisiae) gibi yüksek voltaj (>2500V) ve kısa zaman sabiti (time constant) gerektiren elektro-kompetan hücre transformasyonlarında altın standarttır.
- Kare Dalga Teknolojisi (Square Wave): Elektrik akımı set edilen voltaj değerine yükselir, belirlenen süre boyunca (milisaniyeler düzeyinde) o voltajda tamamen düz bir çizgide (kare şeklinde) sabit kalır ve süre bitiminde anında sıfıra düşer. Memeli hücre hatları, kök hücreler ve primer hücrelerin hassas transfeksiyonlarında hücresel canlılığı korumak için en ideal yöntemdir.
- Kuvet Seçenekleri ve Alan Şiddeti (E): Elektroporasyon verimliliği, elektrotlar arasındaki mesafe (d) ve voltaj (V) ile belirlenen alan şiddetine (E = V/d) bağlıdır. Cihazlarımızla kullanılan tek kullanımlık steril kuvetler (cuvettes) üç standart aralığa sahiptir: Bakteriler için 1 mm (mikro aralık), maya için 2 mm ve memeli hücreleri için 4 mm.
Kimyasal Transfeksiyon ile Elektroporasyon (Fiziksel Yöntem) Karşılaştırması
| Teknik ve Operasyonel Kriter | Kimyasal Yöntemler (Lipofeksiyon / Kalsiyum Fosfat) | Elektroporasyon Sistemleri (Fiziksel) |
|---|---|---|
| Hücre Tipi Esnekliği | Yapışkan (adherent) memeli hücrelerinde iyidir; ancak süspansiyon, kök ve primer hücrelerde verim çok düşüktür. | Evrenseldir. Bakteriden insana, süspansiyon hücre hatlarından bitki protoplastlarına kadar tüm hücrelerde çalışır. |
| Büyük Molekül Transferi (Cargo) | Sadece belirli boyutlardaki DNA/RNA plazmidleri ile sınırlıdır. | Plazmid DNA, siRNA, mRNA ve doğrudan aktif CRISPR-Cas9 RNP protein komplekslerini aktarabilir. |
| Tekrarlanabilir Veri (Reproducibility) | Ortam pH'ına, lipid kalitesine ve hücre pasaj sayısına bağlı olarak verim sürekli dalgalanır. | Mükemmeldir. Voltaj (V), kapasitans uF ve direnç (Omega) dijital olarak sabitlendiği için her döngüde aynı sonuç alınır. |
| Uygulama Süresi / Hız | Hücrelerin lipid kompleksini emmesi için saatler süren inkübasyonlar gerekir. | Mil saniyeler içinde. Elektriksel puls verildikten hemen sonra hücreler kültüre alınabilir. |
İstanbul Teknopark 